Ressonância de Plasmão de Superfície para análise de alto rendimento
Deteção de alto rendimento e alto desempenho de interações moleculares
A ressonância de plasmão de superfície (SPR) é uma tecnologia de deteção sem rótulos, baseada em ótica, para a monitorização em tempo real das interações de união entre duas ou mais moléculas. O rendimento, a flexibilidade e a sensibilidade da plataforma SPR confere aos investigadores a capacidade de caracterizar interações biomoleculares em qualquer estudo de união. Pode ser estudada uma ampla gama de moléculas, desde iões, fragmentos e pequenas moléculas a proteínas e vírus. A tecnologia SPR oferece dados biofísicos, tais como afinidade, cinética e termodinâmica.
Os biossensores analíticos baseados em SPR são ferramentas poderosas na caracterização de interações moleculares. A combinação de três elementos — o detetor, a superfície do sensor e o sistema de fornecimento de amostras — são fundamentais para o desempenho da experiência.
Deteção ótica em tempo real sem rótulos
As interações de união entre uma molécula na superfície do sensor (ligante) e o(s) seu(s) parceiro(s) de ligação na solução (analito) são monitorizadas em tempo real por SPR.
A SPR utiliza um tipo de reflexão interna total e causa uma redução na intensidade da luz refletida num ângulo específico do lado do vidro da superfície do sensor. À medida que as moléculas se unem, o índice de refração próximo da superfície muda, causando uma mudança no ângulo da intensidade mínima refletida. A mudança no ângulo é proporcional à massa do material ligado. A saída típica é um sensorgrama, que monitoriza a mudança no ângulo em função do tempo.
Deteção SPR+
O Sierra SPR-24/32 Pro aplica a deteção de formação de imagens de Ressonância de Plasmão de Superfície designada SPR+. A SPR+ permite a formação de imagens de matrizes bidimensionais com um nível de sensibilidade de deteção normalmente restrito a matrizes lineares. A SPR+ deriva a sua alta sensibilidade através da combinação da formação de imagens SPR tradicional com luz laser de alta intensidade e leitura ótica de alta velocidade. A intensidade da fonte de luz permite a utilização de câmaras de alta velocidade, que por sua vez permitem mais medições de ressonância por leitura. O resultado líquido é um menor ruído RMS e uma maior precisão na medição de pequenas mudanças de resposta.
Os sensores fáceis de utilizar reduzem a variabilidade do ensaio
Os sensores utilizados nos sistemas Sierra SPR são prismas revestidos a ouro, montados em cartuchos fáceis de manusear. O design torna a instalação simples e elimina variações de ensaio relacionadas com o utilizador. A superfície de ouro, que é necessária à SPR, pode ser revestida com uma monocamada automontada para bloquear a união não específica de proteínas e para facilitar a fixação de moléculas à superfície. A crescente variedade de superfícies químicas de ligação aumenta a utilidade dos biossensores analíticos para uma ampla gama de aplicações.
Novos microfluidos de fluxo contínuo
O fornecimento de amostras à superfície do sensor através de um dispositivo microfluídico de fluxo contínuo produz as medições de união mais precisas. Para o fornecimento de amostras reproduzíveis, o sistema Sierra SPR-24/32 Pro utiliza tecnologia patenteada de Isolamento Hidrodinâmico (HI). O HI é um método para a apresentação de volumes de fluido pequenos, mas altamente discretos, a localizações isoladas numa superfície bidimensional contida dentro de uma célula de fluxo sob fluxo laminar. O direcionamento de fluidos específicos da localização dentro da célula de fluxo é facilitado pela combinação de componentes da focagem hidrodinâmica com evacuação específica da localização. O processo não requer a utilização de barreiras físicas dentro da célula de fluxo ou de válvulas mecânicas para controlar os trajetos do movimento do fluido, permitindo, desta forma, a multiplexagem de alto rendimento ou a construção de matrizes bidimensionais com pontos de deteção individualmente endereçáveis.
Aplicações da Ressonância de Plasmão de Superfície
O Sierra SPR Pro-Series é um biossensor analítico de elevado desempenho e alto rendimento para a caracterização em tempo real, sem rótulos, de interações moleculares através de uma ampla gama de aplicações.
Investigação da união dependente da condição através da utilização de Frame Inject
A investigação tradicional da união dependente da condição exige elevados custos de reagentes, assim como um longo tempo de produção. A Frame Inject permite poupar custos e tempo a um baixo consumo de amostras.
Como influenciar a densidade do ligante através da utilização do acoplamento de aminas
É fundamental encontrar o nível ideal de imobilização para obter medições cinéticas ideais. Aqui, examinamos os parâmetros influenciadores em diferentes alvos de exemplo.
Triagem e caracterização da união de pequenas moléculas a alvos proteicos
A análise em tempo real e sem rótulos (RT-LF) por deteção SPR é uma ferramenta poderosa para a caracterização biofísica de medicamentos de pequenas moléculas e candidatos a medicamentos.
Triagem e caracterização da bioterapêutica
A análise em tempo real e sem rótulos (RT-LF) por deteção SPR é uma ferramenta poderosa para a caracterização biofísica da terapêutica de proteínas.
Tackling Challenging Targets with High-Throughput Biophysical Screening at Novartis
Learn in this note how multiplexing, automation and automated data analysis with Genedata Screener take SPR to the next level in this real-life example.
Espaço bibliográfico Ressonância de Plasmão de Superfície
For Research Use Only. Not for use in clinical diagnostic procedures.